基因型E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal[malB+]K-12(λS)

簡(jiǎn)要說(shuō)明BL21是最早開(kāi)發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株，BL21（DE3）、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來(lái)源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá)，不含T7RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的蛋白表達(dá)(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)（如：pGEX，pMAL質(zhì)粒）。 BL21感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)107cfu/μg。

 操作說(shuō)明

 1.取100μl冰上融化的BL21感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。